lysozyme

Pour des questions sur des TP qui ne trouvent pas de réponse.
préparatrice svt
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lysozyme

Messagepar préparatrice svt » 22 janv. 2015, 16:30

Bonjour

Nous préparons un tp sur l'action du lysozyme afin de mettre en évidence le rôle de la paroi dans la coloration de gram. Nous voudrions montrer qu'au départ micrococcus luteus est gram + puis devient gram - après l'action de l'enzyme.

Nous avons suivit votre protocole ( http://www.didier-pol.net/2ftlyso.htm" onclick="window.open(this.href);return false; ) nous avons bien la lyse des bactéries.

J'ai ensuite recommencé en ajoutant une solution de saccharose à 2mol/L ( à savoir 1 mL de solution de saccharose pour 1 mL de tampon contenant micrococcus ).
J'observe une lyse partielle mais les bactéries ayant résisté sont quand même gram +

Auriez vous une solution?

Je vous remercie d'avance

marie-claude segui
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Re: lysozyme

Messagepar marie-claude segui » 22 janv. 2015, 20:50

Bonsoir,
Nous avons envoyé le lien vers votre question à Mr Didier Pol.

Pol
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Re: lysozyme

Messagepar Pol » 23 janv. 2015, 12:17

Bonjour.
D'après votre description, le saccharose conférant un caractère hypertonique à la solution, il provoque une plasmolyse bactérienne et il est possible que la paroi ne se désagrège pas totalement sans pression interne. Essayez plutôt dans un milieu isotonique au contenu cellulaire et laissez la réaction d'hydrolyse se dérouler plus longtemps. Ainsi, en principe, les cellules resteront fonctionnelles tandis que les parois seront attaquées.
Merci de m'indiquer si vous obtenez le résultat attendu.
Cordialement,
D. Pol

préparatrice svt
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Re: lysozyme

Messagepar préparatrice svt » 28 janv. 2015, 12:25

J'ai simplifié, j'ai tout simplement dissous le lysozyme et Micrococcus dans de l'eau d'évian au concentration données dans votre protocole.
Ça marche sans aucun problème, même les élèves l'ont réalisé sans accrocs et on bien compris le rôle de la paroi sur la coloration de gram.
Je vous remercie

Cordialement
Mlle JULIE Aurore


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