électrophorèse protéines de sérum de lapin

Pour des questions sur des TP qui ne trouvent pas de réponse.
magma
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électrophorèse protéines de sérum de lapin

Messagepar magma » 23 oct. 2012, 22:06

Bonsoir
Pour la 1ère fois j'ai fait au labo une électro de sérum de lapin (sérum Jeulin via Sigma), auparavant je faisais sur du blanc d'oeuf de poule dilué et frais.
Modèle de cuve: jeulin, bande: acétate de cellulose, tampon TBE (tris borate) car j'ai beaucoup de sachets: pour 1L il est concentré 5x, temps de migration 42mn à 160V 20mA.Avec ce matos: blanc d'oeuf résultats corrects.
Avec le sérum de lapin en faisant le dépot à 1,5 cm à partir du milieu du côté cathode, j'ai une migration trop longue sur la bande:env4cm (même temps= 42 mn) et les albumines les plus légères partent en s'évasant. J'avoue que je ne comprends pas trop.
Pour avoir fait des centaines d'électrophorèses sur du sérum humain en labo d'analyses médicales, je n'ai jamais rencontré ce problème.
Cela doit provenir de la tension appliquée aux bornes de la cuve. Si j'applique une tension moins forte 100V 50mA (U pour électro ADN) est-ce que cela va corriger le problème ou alors je réduis le temps?
J'ai cherché dans vos documents sur le web, ce sont des exemples sur gel et pas sur bandes d'acétate de cellulose.
Merci

Pol
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Re: électrophorèse protéines de sérum de lapin

Messagepar Pol » 24 oct. 2012, 12:14

Bonjour.
Vous trouverez des protocoles pour acétate de cellulose aux adresses suivantes :
http://www.didier-pol.net/3elec-protoeuf.htm
http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/ATP/bioch7.htm
Réduire le temps de migration ou réduire la tension sont en effet des solutions possibles si la migration va trop loin. Par ailleurs, il me semble qu'un tampon tris-véronal est plus approprié pour les bandes d'acétate.
Ceci dit, il est nettement plus aisé au point de vue technique de réaliser une électrophorèse sur gel d'agarose plutôt que sur bande d'acétate et les résultats sont moins aléatoires. Voyez par exemple :
http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/ATP/bioch4.htm
Cordialement,
D. Pol


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